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人体本身抗体检测技能总述

时刻:2019-06-20 来历:世界查验医学杂志 作者:武永康,张乃丹,翟建昭 本文字数:8092字

  摘    要: 本身抗体关于本身免疫性疾病的确诊、辨别确诊、作用调查及预后判别具有重要含义。近年来, 跟着抗体挑选新技能的运用, 更多品种的本身抗体被发现, 其运用规模除本身免疫性疾病外, 已扩展至神经体系疾病、肿瘤、消化、生殖及移植等范畴。现在, 本身抗体检测仍存在试剂参比溯源、检测进程一致性、成果同质互认等问题。拟定试剂溯源及标准化操作标准将会引导本身抗体检测向自动化、微量化、智能化、高灵敏、高通量的方向展开, 以便更好地为临床服务。

  关键词: 本身抗体; 标准化操作; 挑选技能; 展望;

  Abstract: Autoantibodies are very important for autoimmune disease to diagnosis, differential diagnosis, curative effect and prognosis.Recent years, with the application of the new antibody screening technology, a growing many kinds of autoantibodies were discovered, and the scope of its application has been expanded to nervous system disease, tumor, digestive and reproductive and other fields besides autoimmune disease.At present, there are many problems in autoantibody detection, such as the reagent cannot be compared with the source, the detection process is inconsistent, and the results cannot be homogenized.The development of guidelines for the traceability and standardization of reagents will guide to the direction of automation, micromation, intelligence, high sensitivity and high throughput, in order to serve for clinic better.

  Keyword: autoantibody; standardized operations; screening technology; prospects;

  本身抗体是指针对本身安排、器官、细胞、细胞亚结构、体内蛋白分子、体内核酸等一切本身抗原的抗体总称, 其本质为机体B细胞排泄的免疫球蛋白[1]。本身抗体分为生理性本身抗体 (或称天然本身抗体) (NAbs) 和病理性本身抗体 (PABs) 。有研讨显现, 生理性本身抗体是保持机体处于健康状况的重要物质, 多为IgM型, 参加机体正常推陈出新, 削减体内细胞凋亡物质的堆积[2]。当机体免疫调节功用受损时, 体内本身抗体许多发作, 多为IgG型, 与本身抗原亲和力高, 构成的免疫复合物经过FcγR激活炎性介质 (细胞因子) 或补体体系, 导致本身免疫性疾病的发作, 这种具有致病损害作用的本身抗体即为病理性本身抗体, 即一般所称的本身抗体[3]。

  1、 本身抗体的品种

  本身抗体品种许多, 一般选用两种分类办法, 一种为以疾病为中心, 即相关本身抗体与该疾病有关, 该分类法关于临床医生本身抗体项目请求具有重要含义, 一起也有助于对该疾病与本身抗体的全面知道;另一种为以靶抗原为中心, 即其命名为抗靶抗原抗体, 这有助于对本身抗体性质的知道, 也有助于对本身抗体对靶向安排进犯构成机体损害的了解。从理论上讲, 机体内存在多少种抗原, 就能发作多少种本身抗体, 因而, 本身抗体扑朔迷离, 品种可达不计其数种, 本身抗体的命名应尽量根据抗体所针对的抗原进行, 便于称号的一致。以靶抗原为中心的本身抗体分类见图1。

人体本身抗体检测技能总述

  1.1、 惯例本身抗体

  跟着本身免疫学科的展开及查验技能的逐步遍及, 本身抗体已成为大大都医疗机构的惯例检测项目, 包含抗核抗体 (ANA) , 抗核抗体谱[包含抗DNA、抗组蛋白及抗可提取性核抗原 (ENA) 抗体谱等], 抗中性粒细胞胞浆抗体[包含抗蛋白酶3抗体 (抗PR3) 、抗髓过氧化酶抗体 (抗MPO) 等], 抗磷脂抗体 (包含抗心磷脂抗体、抗β2糖蛋白I抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体等) , 类风湿关节炎抗体 (包含抗CCP抗体、类风湿因子、抗角蛋白抗体等) , 本身免疫肝病抗体 (包含抗平滑肌抗体、抗线粒体抗体、抗肝肾微粒体-1抗体等) , 肌炎相关抗体 (包含抗Mi-2、抗信号辨认颗粒抗体、抗PM-Scl100等) , 糖尿病抗体 (包含谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛素抗体和胰岛细胞抗体等) 。其间ANA与抗核抗体谱是临床展开最为遍及的两类项目。ANA泛指抗各种核及胞浆抗原成分的一大类抗体, 引荐选用以HEp-2细胞为底物的直接免疫荧光法进行检测。而抗核抗体谱是指针对清晰纯化抗原抗体的调集, 其与传统的ENA抗体谱有所不同, 传统ENA抗体谱检测一般选用磷酸盐缓冲液提取动物胸腺细胞核蛋白作为抗原底物[4]。但因为核成分中的DNA和组蛋白等碱性成分无法被磷酸盐缓冲液 (pH=7.2) 提取, 因而, 传统ENA抗体谱并未包含抗DNA抗体和组蛋白抗体等碱性靶抗原的抗体。

  跟着蛋白重组技能的前进, 简直一切蛋白分子均可重组组成, 现在临床上很少选用传统Western-blot法进行ENA抗体谱的检测, 从理论上讲, 组成纯化抗原检测成果准确可信, 且抗核抗体谱的检测规模远大于ENA抗体谱的规模。ENA抗体谱概念不再被运用, 因而, 选用许多重组蛋白的抗核抗体谱检测试剂盒在临床上已趋遍及, 并被广阔学者所承受。ANA荧光图型与抗核抗体谱靶抗原对应联络见图2。

  图1 以靶抗原为中心的本身抗体命名分类图
图1 以靶抗原为中心的本身抗体命名分类图

  1.2 、新式本身抗体

  跟着蛋白重组及本身抗体挑选技能的展开, 许多新式本身抗体会集呈现, 其间首要包含传统本身免疫疾病发现的一些本身抗体, 别的在其他范畴如神经体系疾病、肿瘤、生殖、消化体系疾病等也呈现了一些新式本身抗体, 为其运用拓宽了规模。肿瘤患者本身抗体反响一般与肿瘤安排或血清中的肿瘤相关抗原 (TAA) 的反常或过度表达相关, 大部分的肿瘤本身抗体都是由TAA诱导发作的, 为肿瘤的确诊和辨别确诊供给了新的试验根据。近年来呈现的新式本身抗体见表1。

  图2 ANA荧光图型与抗核抗体谱靶抗原对应联络
图2 ANA荧光图型与抗核抗体谱靶抗原对应联络

  表1 近年来呈现的新式本身抗体
表1 近年来呈现的新式本身抗体

  2、 本身抗体挑选和发现

  新式本身抗体的发现关于疾病确诊和知道具有重要含义。现在以HEp-2细胞为基质的ANA检测及以肝、肾安排为基质的ANCA和GBM检测已经在临床广泛展开[21,22], 而临床实践进程中, 适当数量的医生和技师只重视了解已知的荧光抗体模型, 关于特别罕见荧光模型许多情况下都片面以为对错特异性染色或杂质而疏忽。实际上, 临床工作中遇到不知道荧光抗体模型时应做具体记载, 并结合患者疾病或临床症状进行剖析, 然后或许发现新的荧光模型与疾病之间的联络, 有利于新式本身抗体发现。

  此外, 传统的Western-blot法也是发现新式本身抗体的检测办法。因为ENA抗原蛋白别离带十分多, 临床上会发现一些所谓的“杂带”, 这些杂带或许便是与疾病相关的新式本身抗体, 但临床实践中也常被疏忽。现在, 因为该法检测ENA抗体谱的局限性, 以及检测成果的不承认性, Western-blot法检测ENA抗体谱已很少运用, 取而代之选用纯化抗原的线性免疫印迹法、化学发光法或液相芯片技能进行检测。

  虽然上述两种办法具有发现新式本身抗体的或许性, 但荧光抗体检测基质及ENA提取物抗原品种有限, 基质并未包含人体一切的抗原物质, 这是发现新式本身抗体的内涵缺点。现在已展开出一些高效挑选本身抗体的办法。

  2.1、 重组cDNA表达文库的血清学剖析 (SEREX)

  SEREX技能是本身抗体挑选的重要手法, 经过提取患者安排mRNA回转录成cDNA后导入噬菌体, 并溶原性感染大肠杆菌构建cDNA表达文库, 将表达产品转印在硝酸纤维膜上, 之后与患者血清反响, 然后对阳性克隆进行PCR测序判定即可得知抗原品种, 一起也选出相应的本身抗体。

  2.2、 噬菌体展现技能

  噬菌体展现技能是将外源基因刺进噬菌体衣壳蛋白基因, 使外源蛋白表达在噬菌体外表, 许多表达外源蛋白的单个噬菌体构成噬菌体文库, 展现的蛋白和血清中IgG本身抗体反响后, 挑选阳性噬菌体并扩增判定, 并选用测序办法承认本身抗原。

  2.3、 蛋白芯片技能

  首要, 归入必定数量的研讨患者及匹配的对照, 然后寻觅患者与对照最为明显差异表达的信号, 之后将选定的差异本身抗体在大规模患者承认, 以承认选定本身抗体确诊疾病的有效性。现在, 很多学者已测验选用约20 000个重组人蛋白的芯片, 体系性地发现免疫相关疾病及肿瘤的本身抗体[23]。

  3、 本身抗体检测新技能

  二十世纪50年代中期至80年代后期的30余年间, 本身抗体的检测办法首要有直接免疫荧光法、放射免疫法、被迫血凝法、颗粒凝聚法、对流免疫电泳法、免疫双扩散法、放射免疫沉淀法、免疫印迹法等, 首要从细胞及蛋白多肽水平知道本身抗体。关于上述检测办法而言, 鉴于直接免疫荧光法检测成果的直观性、本身抗体检测的广泛性, 在往后一段时刻内, 该办法仍将是不行代替的挑选检测办法。

  上述本身抗体检测办法多为半定量的办法, 难以标准化, 使疾病确诊的特异度、灵敏度受到限制。上世纪90年代后, 跟着纯化靶抗原技能的前进, 试剂厂商选用纯化抗原制造试剂, 进步了本身抗体的检测速度和准确性。本身抗体的检测首要朝2个方向展开, 即多个本身抗体一起检测的高精度、高通量检测办法的液相芯片技能 (又称多元流式点阵仪) 和单项本身抗体准确检测的化学发光法。两种检测办法均为高精度、全自动化大型检测仪器, 但其各有特色, 前者一次检测项目最多达100多项, 但其有必要组合项目一起检测, 关于初诊患者而言, 的确能够经过多个疾病的本身抗体组合, 很快检测出相关疾病的本身抗体, 但其医疗本钱较高, 关于确诊患者, 只需要检测单个或数个曾检测出的阳性本身抗体即可, 这关于液相芯片而言, 多项检测将构成资源糟蹋。跟着医疗变革的推动, 居民医疗将按疾病品种进行稳妥付出, 可促进医院及医生进行准确检测节省医疗本钱。若液相芯片单个检测无法降低本钱的情况下, 化学发光法将显现出其一起优势, 可单个项目检测, 且本钱可控, 因而, 试剂仪器生产商将会对检测技能及检测本钱进行竞赛, 让临床能够得到更多、更好的挑选。

  4、 本身抗体检测标准及一致

  标准或一致是专家对现状评论剖析后的操作主张。本身抗体检测一致的树立恰恰是因为本身抗体检测不标准、不一致、成果可比性差的实际布景下到达的一致定见。职业协会为进步检测质量及成果可比性做出了不懈努力。到现在为止, 首要有两类惯例本身抗体 (ANA及ANCA) 拟定了部分标准。

  4.1、 ANA检测标准

  2014年欧洲本身免疫标准化促进会和本身抗体标准化委员会一起宣布了《抗核抗体检测的世界主张》。2014年8月在第12届本身抗体和本身免疫世界研讨会议上, 构成ANA荧光模型世界一致, 提出关于ANA荧光模型标准化分类命名的世界一致。我国医生协会风湿免疫科医生分会本身抗体检测专业委员会于2018年在中华查验医学杂志上宣布了我国ANA检测一致[24], 首要主张包含: (1) 引荐以HEp-2细胞为试验基质的IIF法是进行ANA检测的参阅办法和首选办法; (2) 主张ANA检测时, HEp-2细胞在试验基质中每显微镜视界 (扩大倍数为200倍) 应可见3~5个有丝分裂细胞; (3) 二抗应运用荧光素符号的抗人IgG抗体; (4) IIF法检测ANA的稀释办法可根据不同的检测试剂而选用倍比稀释体系或根号10稀释体系; (5) 当临床高度疑诊时, 不管ANA总抗体的检测成果怎么, 都需要对针对靶抗原的特异性本身抗体进行检测; (6) 对ANA荧光模型做了相应要求, 必报荧光模型包含:均质型、斑驳型, 细胞核细密斑驳型、着丝点型、核点型、核仁型、胞浆颗粒型、线粒体型、高尔基体型、棒环状型、核膜型, 肌动蛋白型。

  4.2、 ANCA检测标准

  近年来宣布了ANCA检测一致[25,26], 其首要定见如下: (1) 当患者表现为肾小球肾炎 (特别是快速开展的肾小球肾炎) 、有体系特征的皮肤型血管炎, 多个肺结节、上呼吸道缓慢损坏性疾病、长时间鼻窦炎或耳炎、声门下气管狭隘、多发性单神经炎或其他周围神经病变、眶后肿块、巩膜炎等需检测ANCA; (2) 检测抗MPO抗体、抗PR3抗体的高质量办法应作为ANCA的筛查试验; (3) 若抗MPO抗体、抗PR3抗体阴性, 但临床高度置疑小血管炎时, 应引荐到有经历的试验室进行检测; (4) 抗MPO抗体、抗PR3抗体阴性时, 不能扫除腺相关病毒 (AAV) ; (5) 抗MPO抗体、抗PR3抗体阳性有助于确诊AAV, 但不能仅凭此确诊。

  5、 本身抗体检测的问题及展开方向

  本身抗体检测成果在同质化和成果互认方面存在很大妨碍, 原因首要有以下两个方面, 榜首为试剂溯源问题, 现在关于抗原试剂功用点评并无能够溯源参比的世界安排, 因而, 检测成果一般会呈现抗体滴度强弱不等。当厂商试剂比照检测成果呈现差异时, 无法承认哪家试剂检测准确度较高, 临床一般选用检测成果与临床疾病确诊契合率进行剖析, 这虽然是一种比较好的点评办法, 但大大都本身免疫病的确诊标准多为多项目标归纳判别, 患者疾病异质性大, 特别是要点评的本身抗体检测目标往往是辅佐目标, 本身抗体在疾病预示价值方面存在缺点, 该目标在添加灵敏度的一起必然会丢失特异度, 因而给临床和试验室构成巨大困难, 这将是往后本身抗体检测面对的最大问题。第二为试验操作问题, 现在大都本身抗体检测仍以手工操作或半自动仪器检测为主, 检测成果仍受检测办法、查验试剂、查验仪器及试验人员的经历性等许多要素影响, 特别是荧光抗体检测受人为要素影响更大, 包含荧光显微镜的质量、技能人员对图画的知道、荧光强度的感知、视力的好坏等。现在已有医院开端选用电脑图画收集, 然后经过调查显现器上图画进行成果判读, 这也带来新的问题, 如各公司图画收集卡的质量和参数不同, 显现器分辨率及显卡质量等存在很大差异, 同一图画在不同条件下能够得出彻底不同的成果, 这一点值得试验室工作人员留意。

  不久的将来, 本身抗体检测将迎来短期粗暴的展开和长时间标准的调整。跟着本身抗体挑选新技能的广泛运用, 将挑选出与各体系疾病有关的新式本身抗体, 关于疾病确诊、辨别确诊及发病机制的研讨将供给重要的试验根据。此外, 为了更好地将本身抗体检测成果运用于临床, 并到达成果互认, 主张世界国内职业协会等部分牵头拟定试剂溯源及标准化操作标准, 从顶层规划或职业强制标准的高度标准本身抗体查验的试剂生产商、检测试验室及临床医生运用行为。从展开的视点而言, 本身抗体检测最终将完成全自动化、高通量、标准化和人工智能, 然后明显进步本身抗体检测质量, 完成不同试验室成果互认, 进步试验室临床服务才能。

  参阅文献

  [1] RIGON A, INFANTINO M, MERONE M, et al.The inter-observer reading variability in anti-nuclear antibodies indirect (ANA) immunofluorescence test:A multicenter evaluation and a review of the literature[J].Autoimmun Rev, 2017, 16 (12) :1224-1229.
  [2] BURCH P R, ROWELL N R.Do natural autoantibodies prevent autoimmune disease?[J].Immunol Today, 1987, 8 (3) :73-74.
  [3] BAUM S, SAKKA N, ARTSI O, et al.Diagnosis and classification of autoimmune blistering diseases[J].Autoimmun Rev, 2014, 13 (4/5) :482-489.
  [4] SELMI C, CERIBELLI A, GENERALI E, et al.Serum antinuclear and extractable nuclear antigen antibody prevalence and associated morbidity and mortality in the general population over 15years[J].Autoimmun Rev, 2016, 15 (2) :162-166.
  [5] RU J L, ZHAO Y, XIE X X, et al.Clinical applications of the indirect immunofluorescence assay for detection of anticell membrane-associated DNA antibodies in juvenile systemic lupus erythematosus[J].Pediatr Res, 2015, 77 (2) :376-380.
  [6] YEE A, WEBB T, SEAMAN A, et al.Anti-CarP antibodies as promising marker to measure joint damage and disease activity in patients with rheumatoid arthritis[J].Immunol Res, 2015, 61 (1/2) :24-30.
  [7] VISHWANATH S, EVERETT S, SHEN L, et al.Xerophthalmia of sjogren′syndrome diagnosed with AntiSalivary gland protein 1antibodies[J].Case Rep Ophthalmol, 2014, 5 (2) :186-189.
  [8] RUGGENENTI P, DEBIEC HANNA, RUGGIERO B, et al.Anti-Phospholipase A2receptor antibody titer predicts Post-Rituximab outcome of membranous nephropathy[J].J Am Soc Nephrol, 2015, 26 (10) :2545-2558.
  [9] HOSHINO K, MURO Y, SUGIURA K, et al.AntiMDA5and anti-TIF1-gamma antibodies have clinical significance for patients with dermatomyositis[J].Rheumatology, 2010, 49 (9) :1726-1733.
  [10]YANG H, PENG Q, YIN L.Identification of multiple cancer-associated myositis-specific autoantibodies in idiopathic inflammatory myopathies:a large longitudinal cohort study[J].Arthritis Res Ther, 2017, 19 (1) :259.
  [11] KOICHI Y, AYA Y, MEGUMI U, et al.A case of antiMDA5-positive rapidly progressive interstitial lung disease in a patient with clinically amyopathic dermatomyositis ameliorated by rituximab, in addition to standard immunosuppressive treatment[J].Mod Rheumatol, 2017, 27 (3) :536-540.
  [12]YANG Y, YUAN C, SHEN S Q, et al.Autoantibodies to NR2Apeptide of the glutamate/NMDA receptor in patients with seizure disorders in neuropsychiatric systemic lupus erythematosus[J].Mediators Inflamm, 2017, 74 (5) :5047898.
  [13] HUI A T, LAM Y O, CHAN C K, et al.A case of refractory seizure with cognitive impairment due to anti-GABA encephalitis[J].Hong Kong Med J, 2016, 22 (5) :509-511.
  [14]VERKMAN A S, PHUAN P W, ASAVAPANUMAS N, et al.Biology of AQP4and anti-AQP4antibody:therapeutic implications for NMO[J].Brain Pathol, 2013, 23 (6) :684-695.
  [15] NOZOE T, NOZOE E, KONO M, et al.Further evidence to demonstrate the significance of serum appearance of anti-p53antibody as a marker for progressive potential in invasive ductal carcinoma of the breast[J].J Med Invest, 2017, 64 (3.4) :241-244.
  [16] LIST M, JAMOUS F, GUPTA A, et al.Anti-Hu positive antibodies and small cell carcinoma:a single center review[J].S D Med, 2015, 68 (6) :251, 253-5.
  [17]KAY L, BAUER S, KOCZULLA A R, et al.Ondine′curse and temporal lobe seizures:anti-Hu-and Zic4-associated paraneoplastic brainstem and limbic encephalitis[J].Eur J Neurol, 2018, 25 (5) :e59-e60.
  [18] LINNOILA J, GUO Y, GADOTH A, et al.Purkinje cell cytoplasmic antibody type I (anti-Yo) :predictive of gastrointestinal adenocarcinomas in men[J].J Neurol Neurosurg Psychiatry, 2018, 89 (10) :1116-1117.
  [19]KUNSTREICH M, KRETH J H, OOMMEN P T, et al.Paraneoplastic limbic encephalitis with SOX1and PCA2antibodies and relapsing neurological symptoms in an adolescent with Hodgkin lymphoma[J].Eur J Paediatr Neurol, 2017, 21 (4) :661-665.
  [20] GREENE M, LAI Y, BAELLA N, et al.Antibodies to delta/notch-like epidermal growth factor-related receptor in patients with anti-Tr, paraneoplastic cerebellar degeneration, and hodgkin lymphoma[J].JAMA Neurol, 2014, 71 (8) :1003-1008.
  [21] XU P C, CHEN T, GAO S.Clinical and pathologic characteristics of pauci-immune anti-myeloperoxidase antibody associated glomerulonephritis with nephrotic range proteinuria[J].Ren Fail, 2018, 40 (1) :554-560.
  [22]TAMAMOTO T, NAGAO A, SUGANO M.Detection of anti-neutrophil cytoplasmic antibodies in dogs with immune-mediated inflammatory diseases[J].Vet Immunol Immunopathol, 2018, 203 (5) :47-51.
  [23]HU C J, PAN J B, SONG G, et al.Identification of novel biomarkers for behcet disease diagnosis using human proteome microarray approach[J].Mol Cell Proteomics, 2017, 16 (2) :147-156.
  [24]我国医生协会风湿免疫科医生分会本身抗体检测专业委员会.抗核抗体检测的临床运用专家一致[J].中华查验医学杂志, 2018, 41 (4) :275-280.
  [25] BOSSUYT X, COHEN TERVAERT J W, ARIMURA Y, et al.Position paper:Revised 2017international consensus on testing of ANCAs in granulomatosis with polyangiitis and microscopic polyangiitis[J].Nat Rev Rheumatol, 2017, 13 (11) :683-692.
  [26] 我国医生协会风湿免疫科医生分会本身抗体检测专家委员会.抗中性粒细胞胞浆抗体的临床运用专家一致[J].中华查验医学杂志, 2018, 9 (41) :644-650.

    武永康,张乃丹,翟建昭.本身抗体检测现状及展望[J].世界查验医学杂志,2019,40(11):1368-1373.
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